https://3rabica.org/index.php?action=history&feed=atom&title=%D8%B9%D9%82%D8%AF%D9%8A%D8%A7%D8%AAعقديات - تاريخ المراجعة2026-06-06T17:32:12Zتاريخ التعديل لهذه الصفحة في الويكيMediaWiki 1.43.7https://3rabica.org/index.php?title=%D8%B9%D9%82%D8%AF%D9%8A%D8%A7%D8%AA&diff=2308198&oldid=prevعبد العزيز: بوت: إصلاح أخطاء فحص أرابيكا من 1 إلى 1042023-06-03T18:51:15Z<p>بوت: إصلاح أخطاء فحص أرابيكا من 1 إلى 104</p>
<p><b>صفحة جديدة</b></p><div>{{يتيمة|تاريخ =أبريل 2023}}<br />
{{مصادر أكثر|date=June 2013}}<br />
<br />
نظام '''عقديات''' هو طريقة تسمح بتنقية [[بروتين|البروتينات]] واكتشافها عن طريق [[استشراب انجذابي|كروماتوجرافيا التقارب]]. '''عقديات''' 2 عبارة عن [[ببتيد]] صناعي يتكون من ثمانية [[حمض أميني|أحماض أمينية]] ( [[تريبتوفان|Trp]] - [[سيرين|Ser]] - [[هستيدين|His]] - [[برولين|Pro]] - [[جلوتامين|Gln]] - [[فينيل ألانين|Phe]] -[[حمض الجلوتاميك|Glu]] - [[لايسين|Lys]]). يُظهر تسلسل الببتيد هذا تقاربًا جوهريًا تجاه ستريب تاكتين، وهو [[ستربتافيدين]] مصمم خصيصًا، ويمكن دمج N- أو C- نهائيًا مع البروتينات المؤتلفة. من خلال استغلال التفاعل المحدد للغاية، يمكن عزل البروتينات ذات العلامات ''العنقودية'' في خطوة واحدة من محلولات الخلايا الخام. نظرًا لأن العقديات تزيل في ظروف فسيولوجية لطيفة، فهي مناسبة بشكل خاص لتوليد البروتينات الوظيفية.<ref>{{استشهاد بدورية محكمة|صفحات=1528–35|DOI=10.1038/nprot.2007.209|سنة=2007|الأخير=Schmidt|الأول=Thomas GM|الأخير2=Skerra|الأول2=Arne|المجلد=2|العدد=6|PMID=17571060|صحيفة=Nature Protocols|عنوان=The Strep-tag system for one-step purification and high-affinity detection or capturing of proteins}}</ref><ref>{{استشهاد بكتاب|عنوان=Use of the Strep-Tag and streptavidin for detection and purification of recombinant proteins|مؤلف=Skerra|مؤلف1-الأول=A|سنة=2000|المجلد=326|صفحات=271–304|isbn=978-0-12-182227-9|سلسلة=Methods in Enzymology|doi=10.1016/S0076-6879(00)26060-6|pmid=11036648|مؤلف2=Schmidt|مؤلف2-الأول=TG}}</ref><br />
<br />
== تطوير والكيمياء الحيوية للعلامة عقديات ==<br />
[[ستربتافيدين|الستربتافيدين]] هو بروتين رباعي النواة يعبرعنه في ستربتوميسيس أفيدينيا. بسبب تقارب ستربتافيدين العالي لفيتامين إتش ([[بيوتين|البيوتين]])، يستخدم ستربتافيدين بشكل شائع في مجالات [[علم الأحياء الجزيئي|البيولوجيا الجزيئية]] والتكنولوجيا [[تقانة حيوية|الحيوية]]. أختير علامة بكتيريا في الأصل من مكتبة وراثية لربطها على وجه التحديد بنسخة "أساسية" مبتورة بروتينيًا من الستربتافيدين. على مر السنين، حسنت علامة بكتيريا بشكل منهجي، للسماح بمرونة أكبر في إختيار موقع المرفقات. علاوة على ذلك، أيضًا حُسن شريك التفاعل، ستربتافيدين، لزيادة قدرة ربط الببتيد، مما أدى إلى تطوير ستريب تاكتين. تقارب ربط العقديات بـستريب تاكتين أعلى بحوالي 100 مرة من العقديات إلى ستربتافيدين. أثبت ما يسمى بنظام العقديات، الذي يتكون من العقديات و ستريب تاكتين، أنه مفيد بشكل خاص للعزل الوظيفي وتحليل مجمعات البروتين في أبحاث [[بروتيوميات|البروتينات]].<ref>{{استشهاد بدورية محكمة|صفحات=10547–53|DOI=10.1073/pnas.94.20.10547|سنة=1997|الأول=Christian|الأخير2=Harrenga|الأول2=Axel|الأخير3=Ermler|الأول3=Ulrich|الأخير4=Michel|الأول4=Hartmut|المجلد=94|العدد=20|PMID=9380672|PMCID=23397|صحيفة=Proceedings of the National Academy of Sciences|عنوان=Structure at 2.7 Å resolution of the ''Paracoccus denitrificans'' two-subunit cytochrome c oxidase complexed with an antibody F<sub>V</sub> fragment|الأخير=Ostermeier}}</ref><br />
<br />
== مبدأ العقديات ==<br />
تمامًا مثل علامات التقارب القصيرة الأخرى ([[وسم عديد الهستيدين|علامة هيس]]،[[وسم فلاج|علامة فلاج]])، يمكن دمج العقديات بسهولة في البروتينات [[حمض نووي معاد التركيب|المؤتلفة]] أثناء الإستنساخ الفرعي لـ<nowiki/>[[دنا متمم|سي دي أن أي]] أو [[جين|الجين]]. لتعبيرها، تتوفر نواقل مختلفة للعديد من الكائنات المضيفة ([[إشريكية قولونية]]، [[خميرة|الخميرة]]، [[حشرة|الحشرات]]، وخلايا [[ثدييات|الثدييات]]). فائدة خاصة لعلامة بكتيريا هي حجمها الصغير نوعًا ما وحقيقة أنها [[خامل|خاملة]] تقريبًا من الناحية الكيميائية الحيوية. لذلك، لا يتأثر إفراز أو طي البروتين وعادة لا يتعارض مع وظيفة البروتين. تعتبر العقديات مناسبة بشكل خاص لتحليل البروتينات الوظيفية، لأنه يمكن الإحتفاظ بإجراء التنقية في ظل الظروف الفسيولوجية. لا يسمح هذا فقط بعزل البروتينات الحساسة في حالتها الأصلية، ولكن من الممكن أيضًا تنقية مجمعات البروتين السليمة،<ref>{{استشهاد بدورية محكمة|صفحات=1199–203|DOI=10.1002/pmic.200400991|سنة=2005|الأخير=Junttila|الأخير2=Saarinen|الأول2=Susanna|الأخير3=Schmidt|الأول3=Thomas|الأخير4=Kast|الأول4=Juergen|الأول5=Jukka|المجلد=5|العدد=5|PMID=15761952|صحيفة=Proteomics|عنوان=Single-step Strep-tag purification for the isolation and identification of protein complexes from mammalian cells|الأول=Melissa R.|الأخير5=Westermarck}}</ref> حتى لو كانت وحدة فرعية واحدة فقط تحمل العلامة.<br />
<br />
في الخطوة الأولى من دورة تنقية علامة بكتيريا، يطبق [[انحلال|محلول الخلية]] الذي يحتوي على بروتين إندماج علامة بكتيريا على عمود مع ستريب تاكتين المعطلة (الخطوة 1). بعد أن يرتبط البروتين الموسوم على وجه التحديد بـستريب تاكتين، فإن خطوة غسل قصيرة مع [[محلول منظم|المخزن]] الفسيولوجي (مثل محلول ملحي مخزّن بالفوسفات، بي بي أس) تزيل جميع البروتينات المضيفة الأخرى (الخطوة 2). هذا بسبب ميل ستريب تاكتين المنخفض لربط البروتينات بشكل غير محدد. بعد ذلك، يستخلص بروتين إندماج العقديات المنقى بلطف بتركيز منخفض من ديثيوبيوتين، والذي يتنافس على وجه التحديد مع جيب ربط البيوتين (الخطوة 3). لتجديد العمود، يزال ديثيوبيوتين عن طريق تطبيق محلول يحتوي على أتش أي بي أي ([[صباغ آزوي|صبغة آزو]] صفراء). يشار إلى إزالة ديثيوبيوتين من خلال تغيير اللون من الأصفر البرتقالي إلى الأحمر (الخطوة 4 + 5). أخيرًا، يغسل محلول أتش أي بي أي بكمية صغيرة من المخزن المؤقت الجاري، مما يجعل العمود جاهزًا للإستخدام في عملية التنقية التالية.<br />
<br />
== تطبيقات العقديات ==<br />
يوفر نظام العقديات أداة انتقائية لتنقية البروتينات في ظل الظروف الفسيولوجية. البروتينات التي يحصول عليها نشطة بيولوجيا وتظهر درجة نقاء عالية جدا (فوق 95%). أيضًا، يمكن استخدام نظام العقديات للكشف عن البروتين في فحوصات مختلفة. إعتمادًا على الظروف التجريبية، الأجسام المضادة العقديات أو ستريب تاكتين، مع علامة إنزيمية (مثل بيروكسيداز الفجل (أتش آر بي))، [[فوسفاتاز قلوي|الفوسفاتيز القلوي]] (آي بي) أو مضان (مثل [[بروتينات فلورية خضراء|البروتين الفلوري الأخضر]] (جي اف بي)). إذا كانت النقاوة العالية مطلوبة، يمكن تنقية المحللة بإستخدام ستريب تاكتين أولاً ثم إجراء تشغيل ثان بإستخدام الأجسام المضادة ضد العقديات. هذا يقلل من التلوث ببروتينات مرتبطة غير محددة، والتي قد تحدث في بعض السيناريوهات النادرة.<br />
<br />
يمكن إجراء الفحوصات التالية بإستخدام نظام الكشف عن علامات بكتيريا:<br />
<br />
* تنقية التقارب في خطوة واحدة<br />
* البروتين: دراسات تفاعل البروتين<br />
* [[Colony blot|لطخة المستعمرة]]، لطخة نقطة، [[لطخة ويسترن]] [[مقايسة امتصاصية مناعية للإنزيم المرتبط|وإليسا]]<br />
* فحص [[Expression clones|إستنساخ التعبير]]<nowiki/>الإيجابي<br />
* [[كيمياء خلوية مناعية|الكيمياء المناعية]] والكيمياء [[كيمياء نسيجية مناعية|المناعية]]<br />
* دراسات توطين البروتينات واستهدافها<br />
<br />
نظرًا لأن العقديات قادرة على عزل مجمعات البروتين، يمكن أيضًا إجراء إستراتيجيات لدراسة تفاعلات البروتين والبروتين. خيار آخر هو تجميد بروتينات العقديات بجسم مضاد محدد عالي التقارب على الألواح الدقيقة أو الرقائق الحيوية.<br />
<br />
يستخدم نظام العقديات/ستريب تاكتين أيضًا في الملاقط الضوئية أحادية الجزيء وتجارب [[مجهر القوة الذرية]]، مما يُظهر ثباتًا ميكانيكيًا عاليًا يمكن مقارنته بأقوى الروابط غير التساهمية المتاحة حاليًا.<ref>Moayed F, Mashaghi A, Tans SJ (2013) A Polypeptide-DNA Hybrid with Selective Linking Capability Applied to Single Molecule Nano-Mechanical Measurements Using Optical Tweezers. PLoS ONE 8(1): e54440. doi:10.1371/journal.pone.0054440</ref><br />
<br />
== أنظر أيضًا ==<br />
<br />
* [[واسم بروتين|علامة البروتين]]<br />
<br />
== مراجع ==<br />
{{مراجع}}<br />
{{شريط بوابات|علم الأحياء}}<br />
<br />
== روابط خارجية ==<br />
<br />
* [http://www.strep-tag.com علامة Strep]<br />
{{Protein tag}}<br />
<br />
[[تصنيف:تقنيات مخبرية]]<br />
[[تصنيف:كيمياء حيوية]]<br />
[[تصنيف:تقنيات علم الأحياء الجزيئي]]<br />
[[تصنيف:تقانة حيوية]]<br />
[[تصنيف:طرق البروتين]]</div>عبد العزيز